Zur Analyse von gelösten freien Aminosäuren in Flüssigkeiten wird die zentrifugierte Probe direkt mittels HPLC-FLD analysiert. Falls nötig können störende Proteine mit 3%iger Perchlorsäure ausgefällt werden. Sollen auch die in Proteinen und Peptiden gebundenen Aminosäuren erfasst werden oder handelt es sich um feste Proben, wird eine vorherige Hydrolyse mit HCl durchgeführt. Die Analyse erfolgt mit reversed-Phase Chromatographie nach Vorsäulenderivatisierung mit OPA (o-Phthaldialdehyd) in Gegenwart von Boratpuffer. Nach der Trennung wird die Probe mit dem Fluoreszenzdetektor (FLD) gemessen. Die Berechnung der Ergebnisse erfolgt über eine externe Kalibrierung und wird in mol/L oder mol/kg angegeben. Prolin und Hydroxyprolin reagieren nicht mit OPA und können bei Bedarf stattdessen mit FMOC (Fluorenylmethyloxycarbonylchlorid) derivatisiert werden.
Kurzbeschreibung engl.
Dissolved free amino acids are analysed directly from the centrifuged sample. If necessary, proteins can be precipitated with 3% perchloric acid. If the amino acids bound in proteins and peptides are also to be analysed, a previous hydrolysis with hydrochloric acid is carried out. Aqueous or acidic extracts can be produced from solid samples. The analysis is carried out with reversed-phase chromatography after precolumn derivatization with OPA (o-phthalaldehyde) in the presence of borate buffer and injection solution. After separation, the sample is measured with the fluorescence detector (FLD). Proline and hydroxyproline do not react with OPA and can instead be derivatized with FMOC (fluorenylmethyloxycarbonyl chloride) if necessary.
Für die Veröffentlichung von Analysenergebnissen des Zentrallabors wurde zusammen mit der Universitätsbibliothek der Technischen Universität Hamburg (tub) folgender Zitiervorschlag erarbeitet:
